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探究胎牛血清在細胞培養(yǎng)中變得渾濁的原因

更新時間:2025-02-08  |  點擊率:464

在細胞培養(yǎng)的過程中,胎牛血清作為一種極為重要的營養(yǎng)來源,被廣泛用于提供細胞生長所需的多種營養(yǎng)成分。然而,在實際操作中,研究者們有時會發(fā)現(xiàn)胎牛血清變得渾濁,這不僅影響了細胞的正常培養(yǎng),還可能引發(fā)對血清品質的擔憂。

胎牛血清的重要性

胎牛血清是從未接觸過外界的胎牛血液中提取的天然成分,因其含有豐富的細胞生長因子、激素、維生素、氨基酸等營養(yǎng)物質,成為細胞培養(yǎng)中的營養(yǎng)添加劑。與新生牛血清、小牛血清和成牛血清相比,胎牛血清的抗體含量較低,降低了與培養(yǎng)細胞發(fā)生交叉反應的風險,是理想的細胞生長補充劑。

胎牛血清渾濁的原因

胎牛血清變得渾濁,可能是由于以下幾種原因造成的:

  1. 纖維蛋白沉淀:纖維蛋白是參與凝血過程的蛋白之一,在血清收集和快速處理過程中,部分纖維蛋白原(可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體)可能仍處于溶解狀態(tài)。然而,當血清經過最后的過濾分裝后,這些纖維蛋白原會在瓶中凝結,形成肉眼可見的大塊沉淀(可達1-2mm),從而導致血清渾濁。

  2. 磷酸鈣沉淀:磷酸鈣是另一種常見的沉淀物,它會使血清呈現(xiàn)輕微的渾濁狀態(tài)。尤其在37℃的培養(yǎng)環(huán)境中,磷酸鈣沉淀的數(shù)量會增加。在顯微鏡下觀察,這些沉淀物像小黑點一樣,由于布朗運動而呈現(xiàn)活動狀態(tài),常被誤認為是微生物污染。

  3. 其他成分沉淀:除了纖維蛋白和磷酸鈣外,血清中的膽固醇、脂肪酸酯、一些蛋白質以及脂蛋白等也可能因各種原因發(fā)生變性或沉淀,導致血清渾濁。這些成分在血清中的穩(wěn)定性受到多種因素的影響,如溫度變化、反復凍融等。

  4. 溫度變化:血清在解凍過程中,如果溫差驟變,容易造成蛋白質等成分的變性或沉淀。例如,水浴融化可能會導致沉淀增多。此外,血清解凍時冰塊和蛋白融化速度不一致,也可能導致局部蛋白濃度過高而產生沉淀。

  5. 反復凍融:解凍后的血清如果再次冷凍,反復多次凍融會影響血清中的蛋白質和生長因子的穩(wěn)定性,導致沉淀增多,進而使血清變得渾濁。

對細胞培養(yǎng)的影響及應對措施

雖然胎牛血清的渾濁現(xiàn)象不會對細胞培養(yǎng)產生直接影響(大多數(shù)研究者及血清生產商已證明這一點),但過多的沉淀物可能會影響血清的過濾和使用效果。因此,在實驗室中,一般不推薦對用于細胞培養(yǎng)的血清進行再次過濾處理。如果血清中出現(xiàn)大量沉淀物,可以通過離心處理去除沉淀物,將上清液直接加入到培養(yǎng)基中一起過濾使用。

為了避免胎牛血清渾濁現(xiàn)象的發(fā)生,建議采取以下措施:

  • 正確的解凍步驟:在解凍血清時,應遵循正確的解凍步驟,并確保溶解過程中每隔一段時間均勻而緩慢地搖動血清,以減少沉淀物的產生。

  • 避免反復凍融:盡量減少血清的反復凍融次數(shù),以保持血清中蛋白質和生長因子的穩(wěn)定性。

  • 適當?shù)膬Υ鏃l件:長期儲存時,應將血清置于2-8℃的冷藏環(huán)境中,并避免在室溫下放置時間過長。

結論

胎牛血清在細胞培養(yǎng)中起著重要的作用,但其渾濁現(xiàn)象卻時有發(fā)生。通過深入了解胎牛血清渾濁的原因,并采取有效的應對措施,我們可以更好地利用這一營養(yǎng)添加劑,為細胞提供一個穩(wěn)定、適宜的生長環(huán)境。同時,這也提醒我們在細胞培養(yǎng)過程中要時刻關注細節(jié),確保每一步操作的準確性和科學性。

 


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