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透析胎牛血清的妙用

更新時(shí)間:2022-03-21  |  點(diǎn)擊率:947

血清是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中常用的生物試劑,市面上有很多種類的血清,今天就來(lái)給大家介紹其中的一款——透析胎牛血清。


透析胎牛血清是采用透析的方法,過(guò)濾去除10KDa以下的小分子(如氨基酸、核苷:次黃piao呤和胸腺核苷等、膽固醇等),而保留血清中的大分子成分,因而可用于一些特定的細(xì)胞實(shí)驗(yàn),比如:需要避免細(xì)胞培養(yǎng)基中一些小分子干擾的實(shí)驗(yàn)。


那么,透析胎牛血清具體適用于實(shí)驗(yàn)中有哪些常見(jiàn)場(chǎng)景?我們來(lái)詳細(xì)講講。

一、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要標(biāo)記氨基酸

使用放射性標(biāo)記小分子,對(duì)生物合成過(guò)程進(jìn)行監(jiān)測(cè),以研究蛋白質(zhì)等大分子的生化性質(zhì)、合成、加工、細(xì)胞內(nèi)傳送、分泌和降解過(guò)程。這時(shí),常將細(xì)胞放在含有充足養(yǎng)分和放射性標(biāo)記氨基酸(如35S標(biāo)記的蛋氨酸或半胱氨酸)的培養(yǎng)液中進(jìn)行標(biāo)記。


為避免外源未標(biāo)記的氨基酸的干擾,這時(shí)所用的血清就是透析胎牛血清,不含蛋氨酸和半胱氨酸,基礎(chǔ)培養(yǎng)基也要求不含蛋氨酸和半胱氨酸。


這種方法常見(jiàn)于生化代謝調(diào)控與疾病的機(jī)理研究。其他常見(jiàn)標(biāo)記物包括14C標(biāo)記的絲氨酸、亮氨酸、纈氨酸或32P標(biāo)記的焦磷酸,這時(shí)培養(yǎng)液中的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和胎牛血清都要求不含有這種小分子。


二、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株的篩選

另一種需要用到透析胎牛血清的情況是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株的篩選。


最常見(jiàn)的基因工程用細(xì)胞株是二氫葉酸還原酶缺陷型(DHFR-)的CHO細(xì)胞。


CHO(DHFR-)細(xì)胞由于不含DHFR,因而只能在含有胸苷、甘氨酸和次黃piao呤的培養(yǎng)基中才能生長(zhǎng)。若將DHFR基因?qū)脒@種缺陷型細(xì)胞,則細(xì)胞能在不含這三種分子的培養(yǎng)液中生長(zhǎng)。同時(shí),加入氨甲喋呤(MTX)可刺激DHFR基因大量表達(dá),與之一同轉(zhuǎn)染的外源基因就能大量表達(dá),因而可以獲得人們所需的基因工程藥物。類似的情況也見(jiàn)于雜交瘤細(xì)胞的篩選。


這時(shí)的胎牛血清由于不含有次黃piao呤和胸腺嘧啶等,也常作為選擇培養(yǎng)基的一部分,參與陽(yáng)性轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆的篩選。


基因調(diào)控的研究

采用報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)(常見(jiàn)熒光素酶作為報(bào)告基因)進(jìn)行基因調(diào)控的研究時(shí),為避免特定外源小分子(如激素等)作為基因激動(dòng)劑的干擾,即需要透析胎牛血清來(lái)培養(yǎng)基因轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞。


Ausbian透析胎牛血清


Ausbian透析胎牛血清:


透析過(guò)濾去除10000D以下小分子(如次黃piao呤和胸腺核苷),避免外源小分子對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生干擾。


適合脈沖示蹤實(shí)驗(yàn)(例如同位素標(biāo)記特定小分子,并加入到培養(yǎng)體系中,以研究細(xì)胞代謝),也適合轉(zhuǎn)染CHO后的篩選等應(yīng)用。


  • 全程冷鏈運(yùn)輸,避免血清反復(fù)凍融給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)影響;

  • 內(nèi)毒素極低:<3EU/ml;

  • 每個(gè)批次提供完整的檢測(cè)報(bào)告。


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