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哪些細(xì)胞培養(yǎng)時,對內(nèi)毒素水平格外敏感

更新時間:2020-11-13  |  點(diǎn)擊率:888

胎牛血清主要的作用就是提供基本的營養(yǎng)物質(zhì)以及提供接觸和伸展因子,它

是采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。此時胎牛各臟器正處生長分化階段,血中含有豐富的生長發(fā)育因子,非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng),一旦胚胎發(fā)育*這些因子自動消失。因此8個月胎齡以上的牛胚胎,已接近足月,不能作為胎牛血清的原料來使用。

 

有下列情況者,對血清內(nèi)毒素應(yīng)格外留意篩選:

 

1.養(yǎng)干細(xì)胞時,干細(xì)胞對內(nèi)毒素非常敏感,如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時,干細(xì)胞很容易死亡。很多使用者,在血清在試用前,就通過提早審核該批次《檢測報告》,以決定是否入圍進(jìn)行試用。

 

2.養(yǎng)免疫細(xì)胞時,過高的內(nèi)毒素可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細(xì)胞集落的形成等。

 

3.基因敲除相關(guān)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn),培養(yǎng)的細(xì)胞要盡可能保持其原始狀態(tài),任何引導(dǎo)細(xì)胞衰老或凋亡的試劑,都會讓后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果“失之毫厘,謬以千里”。在準(zhǔn)備血清和其他試劑時,選擇極低的內(nèi)毒素(hao≤1EU/ml),對實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要;

 

4.原代培養(yǎng)、雜交瘤融合、細(xì)胞轉(zhuǎn)染,或者肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、內(nèi)皮等難養(yǎng)細(xì)胞的擴(kuò)增,這些都需要挑選好的血清給細(xì)胞以有力支持。因此,挑選更低的內(nèi)毒素,是保證實(shí)驗(yàn)順利的第yi步。

 

5.實(shí)驗(yàn)室有些細(xì)胞,需要長期培養(yǎng)、長期凍存,或者經(jīng)常復(fù)蘇、經(jīng)常培養(yǎng)的,血清會經(jīng)常或長時間作用于細(xì)胞。為保證細(xì)胞的健康,都應(yīng)該選用更低內(nèi)毒素的血清,以避免內(nèi)毒素長久對細(xì)胞的毒性影響。

 

總之,血清中內(nèi)毒素含量過高,更容易導(dǎo)致細(xì)胞“亞健康”,造成數(shù)據(jù)不準(zhǔn),或細(xì)胞狀態(tài)不良、老化、甚至死亡,導(dǎo)致試驗(yàn)中斷失敗。血清中的內(nèi)毒素越低越好。

 

因此,應(yīng)選擇那些內(nèi)毒素含量低的血清(如Ausbian等),含量hao在3EU/ml以下。內(nèi)毒素與血清加工制備時的生產(chǎn)衛(wèi)生條件和工藝關(guān)系較大。

 

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